金线莲（Anoectochilus roxburghii）为兰科（Orchidaceae）开唇兰属（Anoectochilus Bl.）多年生草本植物，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，产于福建、浙江、江西、湖南、广东、海南、广西、四川、云南、**东南部[1-2]。金线莲作为名贵珍稀的中药材，性平、味甘，有“药用植物之王”的盛誉，在民间素有“金草”、“神药”、“乌人参”等美称，常用于治疗小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肝炎、肾炎等。在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，被称为“药中之王”[3-5]。由于金线莲对生态条件要求较严，其蕴藏量甚少，且本身植株矮小（高仅4～18 cm，茎径0.5～2.0 mm），根系不发达，生长发育缓慢，使金线莲变得更为珍稀[6]。加之近年自然环境遭受严重破坏，特别是野生资源，人为长期大量无度采挖，以及生态环境遭受破坏，国内野生的金线莲近乎枯绝[7-8]。此外，野生金线莲的种子细小，不具胚乳，自然条件下发芽率极低，而采用扦插进行繁殖，繁殖速度慢，因此在金线莲的产业化种苗生产过程中，主要通过组培方式进行扩繁。而关于金线莲的组培育苗技术，已经十分成熟，相关的研究已较为系统和全面。该文就金线莲的组培快繁研究情况进行了综述，包括组培过程中无菌体系的建立、增殖培养、生根培养及炼苗移栽等方面内容，以为该领域的研究人员提供参考。 1 无菌培养的建立研究 金线莲组培过程中，整株植株均可作为外植体，包括茎段、顶芽、叶片、种子等，但是不同类型的外植体对于其启动均会表现出一定的差别，同时对下一步的增殖也会存在一定的影响。王雅英等以金线莲茎段、叶片、不定芽为试材，比较3种外植体对愈伤组织诱导的影响，结果表明3种外植体均能成功诱导愈伤组织，但以不定芽为外植体进行愈伤组织诱导，效果最佳[9]。而冯亦平以金线莲无菌幼苗的幼嫩叶片为外植体，发现其叶片愈伤组织诱导率极低，且分化周期长，后期不易形成不定芽，而采用茎片（茎段切成厚约2 mm的小片）进行诱导，其诱导率达60%以上，且培养周期也较短，适宜于规模化生产，是作为金线莲快繁外植体的最佳选择[10]。此外，金线莲种子也可作为组培的外植体，张铁采用滇越金线莲种子在不含激素的Hyponex 1培养基上有较好萌发率，并且在添加10%椰乳后原球茎能分化出健壮的苗[11]。而黄慧莲以Knudson C为基本培养基，进行金线莲种子萌发试验，其种子萌发率也可达60%[12]。因此，从以上结果可以看出，以金线莲的种子、叶片、茎段等作为外植体，均成功建立了金线莲的无菌体系，同时在后期也可发育成苗，但综合比较，在金线莲种苗规模化生产过程中，首选外材以金线莲的顶芽、茎段为佳，其启动易，增殖速度快，且能够使得繁育的种苗保持较为一致的遗传性状[13-14]。 2 增殖研究 兰科植物常见的增殖方式一般有原球茎增殖、丛生芽增殖、不定芽增殖等方式，而不同的增殖方式，其受影响的因素差别也较大，其增殖过程主要受激素种类、培养基类型、外植体种类等影响。金线莲通过种子萌发后形成原球茎，原球茎可以直接发育成幼苗，也可以由原球茎产生愈伤组织，再由愈伤组织发育成类原球茎而分化成幼苗，通过类原球茎可以实现大量增殖[15]。同时，金线莲也可通过茎段或顶芽等形成不定芽，以丛生芽发生型的方式进行增殖。黄慧莲等以金线莲种子萌发成原球茎，在Knudson C培养基中添加0.5 mg/L 6-BA，以及马铃薯提取物20%，成苗率可达51%[12]。此外，杨柏云在原球茎的分化试验中比较了TDZ、NAA、S-3307（烯效唑）3种植物生长调节物质对原球茎分化作用的大小，其效果依次为TDZ>S-3307（稀效唑）>NAA[16]。而刘润东等以野生金线莲的茎段为外植体，在MS基本培养基中附加6-BA1.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L和ZT 0.02 mg/L，芽丛的诱导率最高，为95.92%；但在营养体分化期间，宜采用低浓度的激素组合，从而有利于促进芽径增粗和茎、叶的分化[17]。而在腋芽增殖过程中，郝丽丽等发现金线莲对6-BA不敏感，但在培养过程中会有一定的积累效应，以ZT的增殖效果最好[18]。高 燕等研究同样也发现金线莲对6-BA不敏感，当培养基中的6-BA浓度达到4 mg/L仍未出现畸形苗，但在培养过程中6-BA会有积累效应，而在继代增殖培养过程中加入一定量的KT可促进芽的分化和增殖[19]。吴坤林等将6-BA用量添加到5.0 mg/L时，其芽的增殖倍数最大，但芽开始显著老化，节间短[20]。而孟志霞等对6-BA、KT和ZT 3种分裂素进行对比后，却发现6-BA的增殖作用较KT和ZT作用要强，6-BA诱导的芽苗健壮，节间距短，而KT诱导的苗节间距较长，ZT诱导的苗节间距、效果居中[21]。对于不同培养基对金线莲增殖效果的影响，曹天旭研究得出，在VW和KC培养基，金线莲分化的芽数显著多于MS和B5培养，但芽苗质量相对较差，且成苗率仅为4.6%（VW）和14.3%（KC），而在B5培养基，虽仅形成15.9个芽，但芽的颜色黄绿，生长旺盛，而在MS培养基，分化的芽数最少，但成苗率为26.6%，仅次于培养基；株高在B5和MS培养基高于VW和KC培养基[22]。此外，在相同的培养基情况下，由于金线莲启动时，选用的外植体部位不一样，在丛生芽的诱导阶段和增殖阶段，其效果也会有较大差别。宋丽莎等以金线莲茎节作为外植体进行增殖培养，增殖系数为4.8；以茎尖作为外植体进行增殖培养，增殖系数为2.7，茎节诱导丛生芽的效率明显高于茎尖[23]。