月季组培技术哪位了解

1.1材料  
   试验所用的材料为长春市园林科学研究所抗寒月季基地抗寒月季新品种。  
   1.2方法  
   1．2．1外植体的准备  
   取生长健壮优良母株上带有腋芽的嫩茎，摘除叶片和嫩刺，用自来水冲洗干净后，用浸有75%的酒精棉球擦拭表面5~10S，剪成3~5cm左右的茎段，在超净工作台上，用0.1%升汞溶液消毒10~12分，无菌水冲洗3~5次，再用无菌滤纸吸干表面水分，切成带有1个或2个腋芽的茎段接种到培养基中。  
   1．2．2腋芽的分化与增殖  
   把外植体分别接种于添加6-BA和NAA的MS培养基上进行起始培养，诱导腋芽萌发建立无菌快速繁殖无性系，再将无菌小苗剪切成1~2cm左右的小段接种到添加不同6-BA和NAA的MS培养基中进行继代增殖培养，培养一定时间后对小苗的增殖与生长情况进行观察统计分析，培养基含30g/l糖、8g/l琼脂、pH值5.8~6.5、培养温度（25+-3），每天光照为11~12小时，光照强度1000~1500LX。  
   1．2．3生根与移栽  
   将增殖后长势旺盛、节间绅长适度的无根小苗转接到1/2MS培养基中诱导生根，30天后观察生根情况。  
   生根后的试管苗在常温下炼苗5~7天，移栽到草碳+珍珠岩（体积比为1∶1）的基质中，待成活后小苗高达10cm左右移到田间种植。  
   2结果与讨论  
   2．1腋芽分化  
   将外植体接种到MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培养基上培养7天后，大部分外植体开始萌动，10天腋芽膨大明显，随后长出嫩芽形成无根芽从。  
   为选择出不同质量浓度6-BA对诱导腋芽分化的影响，以MS为基本培养基配制7种附加不同质量浓度（分别为0.10.51.01.52.03.04.0）的6-BA与0.1mg/lNAA配组的腋芽诱导培养基,每组培养基接种40个外植体,培养40天观察其腋芽分化情况（见表1）。  
   表1表明,月季腋芽分化率与培养基中6-BA质量浓度呈抛物线关系,6-BA由0.1增加至3.0时腋芽分化率明显提高,以3.0为最高,腋芽分化率达77.5%;当6-BA的质量继续增加时,其腋芽分化率则明显下降;6-BA质量浓度为0.1时其腋芽分化率最低,仅为7.5%;6-BA质量浓度为5.0时,其腋芽分化率只为15%,可见,培养基中6-BA质量浓度为1.5~3.0时有利于诱导腋芽分化,尤其以2.0~3.0时为最佳。  
   2.2继代增殖培养  
   取自同一种培养基上长势、大小一致的继代培养芽和茎段，同时接种到不同质量浓度的6-BA、NAA的MS培养基中，培养30天后进行观察并统计结果（见表2）。  
   由表2可以看出，在NAA质量浓度相同而6-BA质量浓度不同的处理中，随着6-BA浓度的升高（1.5~3.0）芽苗的增殖倍数也相应提高，NAA为0.05~0.1、6-BA为3.0的处理芽苗增殖倍数高达6.6~6.8倍；可见，培养基中6-BA质量浓度为3.0、NAA质量浓度为0.05时为最佳的诱导腋芽分化的处理组合。  
   2．3生根培养  
   无菌芽苗在分化与增殖培养基中只诱导地上部分，既不断地分枝增殖，曾多次出现现蕾、开花现象，但均不易生根。因此，将原来培养基中的大量元素减半（既1/2MS），并去除BA进行根的诱导。结果在无菌苗根的诱导过程中，生长素的种类和使用浓度起决定性作用，为此对不同种类的生长素NAA、IBA、A、IAA的根效应作对比试验，结果表明，NAA、IBA对抗寒月季无菌苗诱根效应明显优于IAA，但两者之间差异不明显，用IAA进行根的诱导，芽苗基部长出较多的愈伤组织，发根率低，且发根量少，移栽成活率下降，这可能是因为生长过多的愈伤组织影响根系维管束的发育所致，为为了解NAA和IBA的适宜质量浓度，进行了NAA和IBA的质量浓度试验，分别设置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7种质量浓度进行比较，培养30天后观察根系生长情况，表3表明，以1/2MS（大量元素用量减半）+NAA和1/2MS（大量元素用量减半）+IBA培养基对月季根的诱导效果均较为理想，而且浓度都在0.3-0.75mg/l范围内最为适合，但以NAA为最佳。其中NAA生根率最高达92%，移栽成活率高达89%，IBA的生根率也高达90%，移栽成活率达87%。  
   将小苗接种到上述培养基中10天后其基部伤口基本愈合，18天则长出许多小白根，培养30天发根率均达90%以上，且长有3条以上，长度达2.0cm以上白根的占80%以上。  
   2．4炼苗移栽  
   在生根培养基中，无菌苗生长迅速，植株逐渐健壮起来，其根系生长尤为迅速，在多数根系长达1.0cm，其根尖仍保持旺盛生长状态，此时即可进入过度栽培（炼苗）阶段，移栽前先将瓶苗移出恒温培养室，在常温下置于较强散射光中炼苗7天，打开瓶盖后继续炼苗2~7天，然后小心取出放入清水中清洗干净，注意少伤根，移栽到以草碳土+珍珠岩（体积比1∶1）的基质中，浇透水并覆盖塑料膜，保持相对湿度85~90%，温度15~25℃，10天后逐渐揭膜炼苗，15~20天可将塑料膜全部揭除，并浇施营养液补充营养，其成活率一般可达70%以上，待小苗长至10~15cm左右时，就可移植到田间定植。

无菌培养的建立  
   （1）选条  
   从中国科学院、中国农科院等一级科研机构引进6个月季优良品种，分别是“红双喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金丝鸟”。选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。  
   （2）培养基的配制  
   整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.3～1.Omg，6个品种均适用，只是萌发迟早有些差别。  
   （3）清洗外植体  
   采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上，打开紫外灯，做表面灭菌30分钟。  
   （4）消毒与接种  
   在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，灭菌时间快到时，即倾去灭菌溶液，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求，接种到小试管里，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。  
   （5）培养  
   培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12小时/天，光强800～1200LX。

月季组培培养程序  ：
（一）无菌培养的建立  
（1）选条  
 从中国科学院、中国农科院等一级科研机构引进6个月季优良品种，分别是“红双喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金丝鸟”。选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。  
（2）培养基的配制  
 整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.3～1.Omg，6个品种均适用，只是萌发迟早有些差别。  
（3）清洗外植体  
 采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上，打开紫外灯，做表面灭菌30分钟。  
（4）消毒与接种  
 在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，灭菌时间快到时，即倾去灭菌溶液，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求，接种到小试管里，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。  
（5）培养  
 培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12小时/天，光强800～1200LX。  
（二）继代增殖  
 （1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克。  
 （2）5周后，“红双喜”增殖了3.5倍，“白雪山”4.1倍，“和平”、“彩云”5～6倍，“皇冠”、“金丝鸟”达15倍。  
 （3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。  
 （4）壮苗培养  
①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。
②培养条件。光照10～12小时/天，光强800～1800LX，温度20～23℃，最高24～26℃。  
（5）生根与移栽  
 月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2～3厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成活率高。  
 （a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎，经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。  
 （b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到粗沙+园田土（1：3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植密度2～3厘米×4～6厘米/株，移栽完毕浇透水，并用0.1％的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗，能显著提高成活率。  
 （c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85％以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都比较高，并注意通风和温度管理。4～6周后，须做好第二次移植，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中，每杯种1苗，再经4～6周，地上、地下部分都充分生长，有些植株还能开花，此时即可出售，或上盆种植，利于观赏。            （d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，视苗大小，浓度逐渐由0.1％提高到0.3％左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS培养液等，通常每7～10天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。