紫外分光光度计原理是什么

原理：
　物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。

紫外分光光度计基本工作原理：
紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似,利用一定频率的紫外－－可见光照射被分析的有机物质,引起分子中价电子的跃迁,它将有选择地被吸收.一组吸收随波长而变化的光谱,反映了试样的特征.在紫外可见光的范围内,对于一个特定的波长,吸收的程度正比于试样中该成分的浓度,因此测量光谱可以进行定性分析,而且根据吸收与已知浓度的标样的比较,还能进行定量分析
紫外分光光度计特点和主要用途：
紫外-可见光谱仪涉及的波长范围是0.2－－0.8微米（对应波数50000-12500厘米-1）,它在有机化学研究中得到广泛的应用.通常用作物质鉴定、纯度检查,有机分子结构的研究.在定量方面,可测定结构比较复杂的化合物和混合物中各组分的含量,也可以测定物质的离解常数,络合物的稳定常数,物质分子量鉴别和微量滴定中指示终点以及在高效液相色谱中作检测器等.

分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。  
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260  nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD  的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液

透明液体的颜色由所吸收（透过）的光的波长和吸收量的不同而显示不同的颜色和深度，通过检测一定厚度该溶液的吸收波长和吸收量，可以判断溶液中电解质的种类和浓度。紫外可见分光光度计可以在可见光和紫外光光谱之间工作，发射器定强度、定波长发射出的光线在通过等厚度的玻璃皿后，接收器所接收到的强度会有所减弱，通过计算减弱的比例，可以判定溶液的浓度；而通过连续波谱吸收扫描可以大致判断玻璃皿中的溶液的最大特征吸收波长，从而大致判断溶液中可能含有的物质的特征。

紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外－－可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。

紫外分光光度计原理是分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。